通用名稱(chēng)：瘧原蟲(chóng)抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）

英文名稱(chēng)：Plasmodium falciparum and/or Plasmodium vivax antigen test kit（GICA）

【包裝規(guī)格】

20人份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒采用膠體金免疫層析法（GICA）技術(shù)，用于定性檢測(cè)人靜脈全血中惡性瘧原蟲(chóng)抗原和間日瘧原蟲(chóng)的抗原，適用于瘧疾疑似患者的輔助診斷或瘧區(qū)病例篩查。

瘧疾是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的蟲(chóng)媒傳染病，經(jīng)由按蚊叮咬傳播，在人體內(nèi)先后經(jīng)過(guò)肝內(nèi)無(wú)性繁殖和紅細(xì)胞內(nèi)有性繁殖，成批破壞紅細(xì)胞而致病，廣泛流行于熱帶和亞熱帶一些發(fā)展中國(guó)家，同樣也是對(duì)我國(guó)人民健康危害zui嚴(yán)重的傳染病之一。惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白是目前常用于惡性瘧免疫層析診斷的主要靶抗原，而乳酸脫氫酶（pLDH）是于間日瘧的主要靶抗原，另外，pLDH 和HRP-II 具有種和屬特性，因而其是檢測(cè)間日瘧原蟲(chóng)和惡性瘧原蟲(chóng)理想靶抗原。由于pLDH 和HRP-II僅由活蟲(chóng)體產(chǎn)生，血液中pLDH 和HRP-II的水平與蟲(chóng)體血癥呈平行相關(guān)，由此可用于監(jiān)測(cè)藥物的療效及復(fù)燃情況。本產(chǎn)品主要用于間日瘧和惡性瘧感染的臨床輔助診斷，適合于各級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的瘧疾免疫學(xué)輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒是基于抗原和抗體結(jié)合的原理，采用雙抗體夾心法，用于定性檢測(cè)全血紅細(xì)胞中或釋放于紅細(xì)胞中外的瘧原蟲(chóng)含有的特異性可溶性蛋白P.f.惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）和P.v.間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）。

    檢測(cè)時(shí)，滴加5ul全血樣本于試劑卡加樣孔處，隨后垂直緩慢滴加4滴裂解液，裂解后的樣本在毛細(xì)管效應(yīng)下向上層細(xì)。如果血樣中存在P.v.間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）抗原時(shí)，將與預(yù)標(biāo)記的抗間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）抗體反應(yīng)形成復(fù)合物，在層析作用下，被預(yù)先固定在膜上的抗間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）抗體捕獲，在檢測(cè)區(qū)內(nèi)形成一條紫紅色P.v.（T1）條帶，此時(shí)為間日瘧陽(yáng)性結(jié)果；如果血樣中存在P.f.惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）抗原時(shí)，將與預(yù)標(biāo)記的抗惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）抗體反應(yīng)形成復(fù)合物，在層析作用下，被預(yù)先固定在膜上的抗惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）抗體捕獲，在檢測(cè)區(qū)內(nèi)形成一條紫紅色P.f.（T2）條帶，此時(shí)為惡性瘧陽(yáng)性結(jié)果；如果血樣中存在P.f.惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）抗原和P.v.間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）時(shí)，將分別與預(yù)標(biāo)記的抗惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）和抗體間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）反應(yīng)形成復(fù)合物，在層析作用下，分別與被預(yù)先固定在膜上的抗惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）抗體和間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH抗體）捕獲，在檢測(cè)區(qū)內(nèi)形成一條紫紅色P.f.（T2）條帶和一條紫紅色P.v.（T1）條帶，此時(shí)為惡性瘧和間日瘧混合型陽(yáng)性結(jié)果；如果樣本中不存在P.v.間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）抗原或者P.f.惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）抗原時(shí)，質(zhì)控區(qū)（C）會(huì)形成一條紫紅色C條帶，在檢測(cè)區(qū)內(nèi)沒(méi)有形成P.v.（T1）或者P.f.（T2） 紫紅色條帶，此時(shí)為陰性結(jié)果；由于金標(biāo)抗體過(guò)量存在，無(wú)論待測(cè)物是否存在于樣本中，質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)都會(huì)形成一條紫紅色條帶，質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)所顯示的紫紅色條帶是判定是否有足夠樣本量及層析過(guò)程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為試劑盒的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

【主要組成成份】

1.  試劑卡 : 1人份/鋁箔袋     20人份/盒

包含：二對(duì)抗惡性瘧原蟲(chóng)富組氨酸蛋白（HRP-II）特異性單抗、二對(duì)抗間日瘧原蟲(chóng)乳酸脫氫酶（pLDH）單抗、羊抗鼠IgG多克隆抗體、 硝酸纖維素膜、 玻璃纖維膜、吸水紙及其支持物組成。

2．   裂解液： 5ml/瓶  X  1瓶

包含：三（羥甲基）氨基甲烷（Tris）、鹽酸、聚乙二醇辛基苯基醚（Trion X-100）、牛血清白蛋白、疊氮鈉和超純水。

3．使用說(shuō)明書(shū)    1份

【儲(chǔ)存條件及有效期】

1.    包裝盒應(yīng)儲(chǔ)存在4～30℃，陰涼避光干燥處，產(chǎn)品有效期為18個(gè)月，鋁箔袋開(kāi)封后，試劑卡應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)盡快使用。

2.    運(yùn)輸過(guò)程中，本產(chǎn)品在高溫高濕（45℃、濕度80-90%）的環(huán)境中放置10天或者于低溫低濕（-20℃、濕度30-40%）環(huán)境中放置10天均不會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)性能造成影響，但運(yùn)輸過(guò)程中同時(shí)也需避免陽(yáng)光直曬及重壓。

【適用儀器】

無(wú)需使用其他儀器。

【樣本要求】

1．   采靜脈全血少量（5ul即可），樣本收集后應(yīng)盡快使用。全血樣本在2～8℃可以保存3天，如果需要長(zhǎng)期保存，請(qǐng)?jiān)?20℃保存，避免反復(fù)凍融。樣本需要在含干冰的保溫瓶或其它裝置條件下運(yùn)輸。

2．   全血樣本對(duì)臨床常用抗凝劑（EDTA、肝素和枸櫞酸鈉）無(wú)要求。

【檢驗(yàn)方法】

測(cè)試前請(qǐng)閱讀使用說(shuō)明書(shū)，測(cè)試應(yīng)在室溫下進(jìn)行。

1、沿鋁箔袋切口部撕開(kāi)中取出，將檢測(cè)盒平放在工作臺(tái)上，編號(hào)代用；

2、使用微量移液器，在加樣孔前端垂直緩慢加入5μl待檢全血；

3、然后再在加樣孔后端垂直緩慢加入4滴裂解液，等待觀察窗中紫紅色條帶的出現(xiàn)；

4、檢測(cè)結(jié)果應(yīng)在15-30分鐘內(nèi)讀取，30分鐘判斷的結(jié)果無(wú)效。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

陽(yáng)性（+）：觀察窗內(nèi)有二條紫紅色條帶出現(xiàn)，分別位于在檢測(cè)區(qū)（T1）及質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)，提示為間日瘧原蟲(chóng)（P.v.）感染；

陽(yáng)性（+）：觀察窗內(nèi)有二條紫紅色條帶出現(xiàn)，分別位于在檢測(cè)區(qū)（T2）及質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)，提示為惡性瘧原蟲(chóng)（P.f.）感染；

陽(yáng)性（+）：觀察窗內(nèi)有三條紫紅色條帶出現(xiàn)，分別位于在檢測(cè)區(qū)（T1,T2）及質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)，提示為惡性瘧原蟲(chóng)（P.f.）和間日瘧原蟲(chóng)（P.v.）混合感染；

陰性（-）：僅在質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，提示沒(méi)有瘧原蟲(chóng)感染；

無(wú)效：在質(zhì)控區(qū)（C）處未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或者試劑盒已變質(zhì)失效，在這種情況時(shí)，應(yīng)重新檢測(cè)。如果問(wèn)題仍然存在，應(yīng)立即與廠家或者當(dāng)?shù)毓?yīng)商。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1.    本試劑盒僅供檢測(cè)人全血樣本；

2.    全血樣本若存在操作或技術(shù)上的原因，會(huì)造成結(jié)果出錯(cuò)，若結(jié)果可疑，請(qǐng)重新測(cè)試；

3.    本檢測(cè)盒與所有的其它體外診斷試劑一樣，檢測(cè)的結(jié)果必須結(jié)合臨床進(jìn)行診斷。

【參考值（參考范圍）】

試劑zui低檢出量為200個(gè)瘧原蟲(chóng)/μl血。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1.    使用不同抗凝劑（EDTA、肝素和枸櫞酸鈉）時(shí)，其對(duì)試劑的檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響。

2.    經(jīng)實(shí)驗(yàn)室研究表明：本試劑不與本品對(duì)肺吸蟲(chóng)、HIV、結(jié)核、乙肝、類(lèi)風(fēng)濕因子、黑熱病和錐蟲(chóng)病抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，產(chǎn)品特異性良好。并且當(dāng)待檢樣本中膽固醇含量低于230g/L時(shí)，其對(duì)試劑的檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響，當(dāng)待檢樣本中膽紅素含量低于760mg/L時(shí)，其對(duì)試劑的檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響，當(dāng)待檢樣本中甘油三酯含量低于280g/L時(shí)，其對(duì)試劑的檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響。

3.    臨床試驗(yàn)結(jié)果：本次臨床實(shí)驗(yàn)共收集1222例血樣，本試劑的陽(yáng)性符合率為96.1%，對(duì)于陰性符合率為96.1%，總符合率為96.1%，Kappa值為0.916（P<0.05），并且不受AIDS、結(jié)核、乙肝、梅毒、寄生蟲(chóng)和三日瘧的干擾。

4.    經(jīng)實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)，本試劑在瘧疾病人的抗瘧治療中，能夠真實(shí)反映臨床治療效果，檢測(cè)結(jié)果良好，并且不受檢測(cè)時(shí)限的限制和場(chǎng)地的影響。

【注意事項(xiàng)】

1.    本試劑盒僅用于人全血樣本檢測(cè)，已收集到的靜脈全血樣本應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)盡快檢測(cè)，效果*；已開(kāi)封的試劑應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)盡快使用；

2.    檢測(cè)結(jié)果應(yīng)在15-30分鐘內(nèi)讀取，30分鐘判斷的結(jié)果無(wú)效；

3.    低溫保存的試劑盒，使用前需將檢測(cè)試劑卡、裂解液和全血樣本恢復(fù)至室溫（20-30℃）；

4.    當(dāng)瘧原蟲(chóng)密度很高時(shí)檢測(cè)條帶很明顯，質(zhì)控線(xiàn)條帶可能變得很弱，此結(jié)果仍視為有效結(jié)果；

5.    檢測(cè)區(qū)內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象，但是，在規(guī)定的觀察時(shí)間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判為陽(yáng)性結(jié)果；

6.    由于操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時(shí)也由于樣本中存在干擾物質(zhì)，試劑結(jié)果有可能錯(cuò)誤，對(duì)可疑結(jié)果應(yīng)作相應(yīng)的進(jìn)一步檢測(cè)；

7.    不要在注明的失效日期后使用；

8.    鋁箔袋包裝袋內(nèi)有干燥劑，不得內(nèi)服；

9.    與所有診斷試劑一樣，zui終的確診應(yīng)由醫(yī)生綜合各檢測(cè)指標(biāo)及臨床癥狀后作出；

10.   陰性結(jié)果并不能排除早期瘧原蟲(chóng)感染的可能性；

11.   在測(cè)試過(guò)程中，應(yīng)遵循處理傳染性物質(zhì)的通用規(guī)范，操作人員必須配戴好個(gè)人防護(hù)用品，用過(guò)的檢測(cè)盒和加液器搶頭請(qǐng)妥善處理，不要隨意丟棄，按照生物安全管理要求，進(jìn)行高壓消毒后，放入“生物廢棄物”黃色袋內(nèi)集中收集，交給專(zhuān)業(yè)的生物廢棄物公司統(tǒng)一處理。

【參考文獻(xiàn)】

1.    中國(guó)生物制品規(guī)程（2000年版）2002增補(bǔ)本

2.    瘧疾防治手冊(cè)

3.    World Health Organization Press Release （2001） May 23, “WHO and Novartis join forces to combat drug resistant malaria.” World Health Organization Fact Sheet （1998） , Malaria, No.94

4.    Chayani N, Das B, Sur M et al, Comparison of parasite lactate dehydrogenase based immunochromatographic antigen detection assay（optimal） with microscopy for detection of malaria parasites[J]. Indian J Med Microbiol, 2004, 22（2）: 104-106

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